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使用zeta life轉(zhuǎn)染試劑過程應(yīng)注意以下幾點(diǎn)

發(fā)布時間： 2022-12-09　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1759次

　　zeta life轉(zhuǎn)染試劑用于將DNA和siRNA轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中，可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞，如:T細(xì)胞、NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1等，可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細(xì)胞。
　　使用zeta life轉(zhuǎn)染試劑過程要注意以下幾點(diǎn)：
　　1.細(xì)胞密度：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒時，細(xì)胞密度為80-100%，轉(zhuǎn)染RNA(siRNA或miRNA)時，細(xì)胞密度為60-80%，具體細(xì)胞密度必須結(jié)合考慮核酸種類、轉(zhuǎn)染試劑種類和細(xì)胞生長密度極限。
　　2.RNA用量：10-30 pmol/孔（以24孔板為例），具體用量根據(jù)轉(zhuǎn)染效率檢測實(shí)驗(yàn)確定。
　　3.試劑用量：轉(zhuǎn)染試劑說明書推薦了一個使用范圍，具體用量根據(jù)轉(zhuǎn)染效率檢測實(shí)驗(yàn)確定。
　　4.根據(jù)轉(zhuǎn)染效率檢測實(shí)驗(yàn)確定核酸的用量及轉(zhuǎn)染試劑的用量（核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例關(guān)系），轉(zhuǎn)染效率檢測實(shí)驗(yàn)一般在24孔板中進(jìn)行，其他格式的培養(yǎng)器皿請根據(jù)底面積的比例進(jìn)行計(jì)算。
　　5.轉(zhuǎn)染試劑使用前才從4℃中取出，取用前，先短暫離心，然后放在渦旋振蕩器上點(diǎn)動混勻三次，每次持續(xù)1秒，混勻后短暫離心，上述措施是為了混勻轉(zhuǎn)染試劑，保證使用效果，使用后立即放回4℃保存。
　　6.核酸和轉(zhuǎn)染試劑分別用Opti-MEM稀釋，稀釋的核酸可以通過彈勻，吹打均勻，顛倒混勻或渦旋點(diǎn)動混勻，稀釋的轉(zhuǎn)染試劑可以通過彈勻，顛倒混勻或渦旋點(diǎn)動混勻，不可使用吹打均勻；混勻后均需短暫離心。
　　7.把稀釋的核酸和稀釋的轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合混勻時，應(yīng)該把稀釋的核酸加入稀釋的轉(zhuǎn)染試劑中（順序不可調(diào)轉(zhuǎn)）；加入后立即進(jìn)行（不要耽擱）彈勻或顛倒混勻，先不進(jìn)行短暫離心，待所有的管子復(fù)合完畢后，在一起進(jìn)行渦旋點(diǎn)動混勻三次，每次持續(xù)1秒，然后短暫離心。
　　8.轉(zhuǎn)染復(fù)合物孵育形成時盡量避光室溫或37℃放置。
　　9.進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)染時，盡量使用無酶及滅菌處理的耗材。

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